TCID50 · REED-MUENCH · KÄRBER
TCID50 计算器详细说明书
根据连续稀释实验中各稀释度的 CPE 阳性孔数，同时计算 Reed-Muench 与 Kärber 终点，并换算 TCID50/mL 和估算 PFU/mL。
官网版打开即可计算，适合手机临时使用；工作台版支持项目、文件夹、自动保存、结果导出和回收站。注册会员可免费使用工作台 TCID50 模块。
1. 适用场景
- 适用于连续稀释、多复孔，并以 CPE 阳性/阴性判断感染结果的病毒滴度实验。
- 同一组计算中的细胞状态、培养时间、接种体积和判读标准应保持一致。
- 软件负责公式计算与记录整理，实验有效性仍需结合阳性对照、阴性对照和实际 CPE 判读。
2. 开始前准备
- 确认病毒稀释范围，例如 10-1 至 10-6。
- 确认相邻稀释度的对数间隔。10 倍连续稀释时填写
d = 1。 - 确认每个稀释度总孔数，例如 8 孔，并记录每一级 CPE 阳性孔数。
- 确认每孔实际加入的病毒液体积，软件据此换算每毫升滴度。
3. 实验参数
| 参数 | 填写说明 |
|---|---|
| 起始稀释指数 | 10-1 的指数填写 1。 |
| 结束稀释指数 | 10-6 的指数填写 6。 |
| 对数间隔 d | 10 倍稀释填 1；其他稀释按实际方案填写。 |
| 每级总孔数 | 每一个稀释度实际用于判读的复孔总数。 |
| 每孔接种体积 | 每孔加入的病毒液体积，单位为 µL。 |
| PFU 换算系数 | 默认 0.7，仅用于近似估算，不等同于噬斑实验实测结果。 |
4. 录入 CPE 阳性孔数
- 按稀释顺序从低稀释度到高稀释度录入，例如
8, 8, 7, 3, 1, 0。 - 可逐行填写，也可一次粘贴；逗号、中文逗号、空格和换行均可作为分隔符。
- 每个数值必须是 0 至总孔数之间的整数。
- 更新稀释表后，先核对每一行与原始记录是否对应，再开始计算。
不要把“无 CPE 孔数”填入阳性孔列。若总孔数为 8，观察到 3 孔出现 CPE，应填写 3。
5. Reed-Muench 与 Kärber
Reed-Muench 累计交界法
软件计算累计 CPE 与累计无 CPE，并在累计阳性率跨越 50% 的相邻稀释度之间插值。若没有形成 50% 交界，软件会提示无法确定结果。
Kärber 阳性率求和法
按 lgTCID50 = L - d(S - 0.5) 计算，其中 L 为最低稀释度的对数，d 为对数间隔，S 为各稀释度阳性孔比率之和。
每毫升换算
根据终点稀释度和每孔接种体积计算 TCID50/mL；PFU/mL 由设置的系数近似换算，仅供实验设计参考。
6. 结果核对
- 最低稀释度应接近或达到全阳性，最高稀释度应接近或达到全阴性。
- 阳性孔数通常应随稀释增加而总体下降；明显反向变化时应核对加样和判读。
- 同时查看两种方法的 lg 结果及差值。差异较大时先检查实验边界，不要直接取平均。
- 示例
8, 8, 7, 3, 1, 0在默认参数下得到 Reed-Muench-3.81 lg、Kärber-3.88 lg。
7. 工作台项目管理
- 项目默认名称为
TCID50_YYYYMMDD，可随时修改。 - 支持自建文件夹、搜索、复制、移动和项目 JSON 导出。
- 实验参数、CPE 孔数、备注和结果自动保存在本机。
- 删除项目后进入回收站，一个月内可恢复。
- 官网在线版不会保存项目；需要长期归档时使用工作台版。
8. 常见问题
提示未跨越 50%
当前稀释范围没有覆盖清晰的阳性到阴性过渡。检查是否漏填，并考虑扩展稀释范围后重新实验。
结果数量级不正确
核对起止稀释指数、每孔病毒液体积和指数方向。页面输入稀释指数 1、2、3，而不是输入 -1、-2、-3。
两种方法差异较大
检查孔数是否随稀释总体递减、最低稀释度是否全阳、最高稀释度是否全阴，以及总孔数是否正确。
手机上表格列数较少
手机版仅保留序号、稀释度和 CPE 阳性孔三个关键列，其他派生数据会自动计算并显示在结果区。